簡(jiǎn)要描述:siRNA干擾檢測(cè)服務(wù)廠家 (RNA interference, RNAi)技術(shù),是將與內(nèi)源mRNA 編碼區(qū)同源的小片段(19 -23bp)外源雙鏈 RNA(siRNA)導(dǎo)入細(xì)胞中,引發(fā)細(xì)胞中相應(yīng)mRNA 高效特異性降解,從而導(dǎo)致特定基因表達(dá)沉默(knock down)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
siRNA干擾檢測(cè)服務(wù)廠家
原理:RNA干擾 (RNA interference, RNAi)技術(shù),是將與內(nèi)源mRNA 編碼區(qū)同源的小片段(19 -23bp)外源雙鏈 RNA(siRNA)導(dǎo)入細(xì)胞中,引發(fā)細(xì)胞中相應(yīng)mRNA 高效特異性降解,從而導(dǎo)致特定基因表達(dá)沉默(knock down)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù),其中通過構(gòu)建表達(dá)載體表達(dá)siRNA是多種siRNA制備方法中有可能進(jìn)行長(zhǎng)期基因沉默研究的方法,siRNA 載體可以在細(xì)胞內(nèi)直接轉(zhuǎn)錄出shrna ,其干擾效果等同于siRNA ,而且能夠解決 siRNA干擾時(shí)間短的缺點(diǎn)。您只需提供需干擾基因的詳細(xì)信息,包括基因的 mRNA 序列,Genbank Accession No. 和所屬物種,本公司負(fù)責(zé)設(shè)計(jì)3條針對(duì)目的mRNA的siRNA 靶序列,在短時(shí)間內(nèi)構(gòu)建三個(gè)可用于目的mRNA干擾實(shí)驗(yàn)的siRNA 載體并為您進(jìn)行后續(xù)的干擾實(shí)驗(yàn)研究。
siRNA干擾檢測(cè)服務(wù)廠家實(shí)驗(yàn)流程
◇ 選擇siRNA表達(dá)載體 通過人工合成基因的方法將該序列克隆至Clontech公司的RNAi-Ready pSIREN系列表達(dá)載體中,該系列表達(dá)載體帶有Pol III(U6)啟動(dòng)子,具有轉(zhuǎn)染效率高、操作簡(jiǎn)單、rna沉默效果易于檢測(cè)等特點(diǎn),客戶可根據(jù)需要進(jìn)行選擇。
siRNA干擾檢測(cè)服務(wù) (RNA interference, RNAi)技術(shù),是將與內(nèi)源mRNA 編碼區(qū)同源的小片段(19 -23bp)外源雙鏈 RNA(siRNA)導(dǎo)入細(xì)胞中,引發(fā)細(xì)胞中相應(yīng)mRNA 高效特異性降解,從而導(dǎo)致特定基因表達(dá)沉默(knock down)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
◇ 根據(jù)客戶提交的目的mRNA序列,設(shè)計(jì)3條RNA干擾靶序列,靶序列一般為19-21nt 長(zhǎng)。
◇ 對(duì)于每條選定的siRNA 靶序列,設(shè)計(jì) siRNA 正義鏈和反義鏈,以 loop(9nt or 10nt) 相連,形成穩(wěn)定的發(fā)卡RNA,稱為 shRNA(short hairpin RNA)。
◇ 合成模板 合成每條編碼 shRNA的DNA 模板,并連接到 siRNA 載體相應(yīng)的多克隆位點(diǎn)之間。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌。
◇ 抽提陽性克隆質(zhì)粒 公司試劑盒抽提陽性克隆載體并定量。
◇ 轉(zhuǎn)染細(xì)胞 質(zhì)粒直接轉(zhuǎn)染或通過病毒包裝后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,并對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行陽性鑒定和轉(zhuǎn)代細(xì)胞株的培養(yǎng)。