簡要描述:慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性:整合入宿主細(xì)胞基因組,長期表達(dá),可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備;但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性:比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂期細(xì)胞,更重要的,還能感染非分裂期的細(xì)胞。利用慢病毒載體,可以研究啟動(dòng)子的調(diào)控、過表達(dá)特定基因或沉默特定基因。
慢病毒包裝服務(wù)
慢病毒簡介
慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性:整合入宿主細(xì)胞基因組,長期表達(dá),可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備;但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性:比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂期細(xì)胞,更重要的,還能感染非分裂期的細(xì)胞。利用慢病毒載體,可以研究啟動(dòng)子的調(diào)控、過表達(dá)特定基因或沉默特定基因。
慢病毒包裝技術(shù)特點(diǎn)
病毒表達(dá)系統(tǒng) | 腺病毒表達(dá)系統(tǒng) | 慢病毒表達(dá)系統(tǒng) |
病毒基因組 | 雙鏈DNA病毒 | RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒 |
自主復(fù)制 | 不能 | 不能 |
是否整合 | 病毒基因組游離于宿主基因組外,瞬時(shí)表達(dá)外源基因 | 病毒基因組整合于宿主基因組,長時(shí)間、穩(wěn)定表達(dá)外源基因 |
感染細(xì)胞類型 | 感染絕大多數(shù)細(xì)胞,包括分裂期、非分裂期細(xì)胞。 | 感染絕大多數(shù)細(xì)胞,包括分裂期、非分裂期細(xì)胞。 |
表達(dá)豐度 | 高水平表達(dá) | 中水平表達(dá) |
表達(dá)時(shí)間 | 快(1-2 天) | 慢(2-4 天) |
滴度 | 滴度可達(dá)10E12pfu/mL | 滴度可達(dá)10E9-10E10TU/mL |
克隆容量 | 可插入高達(dá)8kb的外源片段,滴度隨插入片段長度增加而降低 | 可插入不超過8kb的外源片段,滴度隨插入片段長度增加而降低 |
免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 |
RNAi | 病毒進(jìn)入細(xì)胞往往引起細(xì)胞內(nèi)干擾素反應(yīng),一般情況下不適合做RNAi實(shí)驗(yàn) | 適合,是RNAi實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選工具 |
基因過表達(dá) | 包裝容量較大,可以滿足較大基因的包裝,是過表達(dá)基因的優(yōu)選工具 | 包裝容量有限,過表達(dá)的基因過大時(shí),病毒滴度受到影響 |
過表達(dá)microRNA | 適合 | 適合,是過表達(dá)microRNA實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選工具 |
下調(diào)microRNA | 有報(bào)道但不成熟 | 有報(bào)道但不成熟 |
是否可以自行擴(kuò)增 | 可以 | 需要特殊包裝系統(tǒng)和包裝環(huán)境 |
A. 慢病毒載體的構(gòu)建:
根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建慢病毒載體,如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過表達(dá)的慢病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的慢病毒載體等;
B. 慢病毒包裝過程:
將重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至包裝細(xì)胞中,收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液,對(duì)其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液,在293T細(xì)胞中測定并標(biāo)定病毒滴度。
C. 慢病毒包裝結(jié)果:
滴定濃度:1×107~1×108TU/ml
zui終體積:1 ml純化后的病毒液(儲(chǔ)存于PBS)
儲(chǔ)存:批量儲(chǔ)存的*條件為-80°C。
慢病毒包裝用途:
慢病毒載體包裝之后成為假病毒顆粒后,可用于:
· 感染原代細(xì)胞;
· 制備穩(wěn)定表達(dá)/沉默特定基因的單克隆細(xì)胞株;
· in vivo的基因操作;
· 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,特別是轉(zhuǎn)基因大鼠的制備。